![[personal profile]](https://www.dreamwidth.org/img/silk/identity/user.png){kind=small}
nervo4ka*
В этот раз я хочу поговорить о нескольких методах световой микроскопии и на примерах показать их отличия. Простенько расскажу об устройстве светового микроскопа. Объясню три метода микроскопирования (Bright field, Phase-contrast, DIC) и покажу их различия на двух разных объектах - пыльце шиповника и эпителиальной клетке полости рта. Если не осилите теорию (я тоже не с первого раза врубилась, хаха), то можно просто забавные картинки посмотреть.
Базовое устройство светового микроскопа
Изучение препарата (образца) осуществляется в проходящем свете, источником которого может быть обычное освещение комнаты или специальные лампы. С помощью зеркала свет направляется в конденсор. Это короткофокусная линза или система линз, которая собирает и направляет лучи от источника света на образец увеличивая его освещенность. Далее свет проходит через сам препарат лежащий на предметном столике, затем проходит через объектив и поступает в окуляр, в который мы и рассматриваем полученное изображение.
Методы световой микроскопии (некоторые из них)
Существует множество методов световой микроскопии. То, что я описала выше, это самый простой случай - светопольная микроскопия или микроскопирование в светлом поле (по-английски bright field). Образец просто освещается рассеянным светом, а проходящий через него свет преломляется и формирмирует контрастное изображение. Но такой способ подходит не для всех образцов. Если они окрашены с помощью специальных красителей, то изображение четкое. А если нужно посмотреть под микроскопом прозрачные (например, клетки) и желательно живые объекты (например, бактерии или простейших), то информация от таких изображений стремится к нулю. Но если изменить параметры освещения или использовать особые фильтры, то препарат можно увидеть в другом ракурсе и детальнее открывая то, что раньше было скрыто.
Микроскоп Olympus BX53, которым я сейчас микроскопирую, позволяет использовать фазово-контрастный и интерференционный метод, о которых я расскажу подробнее.
Фазово-констрастная микроскопия (Phase-contrast) позволяет получить контрастное изображение прозрачных или бесцветных объектов, в частности живые неокрашенные препараты. Световая волна, проходящая через множество элементов препарата, претерпевает разные изменения по фазе (фазовый рельеф). Эти фазовые изменения глазу не видны, но с помощью специального оптического устройства (кольцевой диафрагмы в конденсоре и фазовой пластинки в объективе) преобразуются в изменения амплитуды световой волны, то есть изменение яркости, которые глазом уже видны. Получаемое таким образом изображение называется фазово-контрастным.
Интерференционная микроскопия (Differential interference contrast (DIC) microscopy). Ее еще называют интерференционно-контрастная микроскопия или микроскопия Номарского. В этом методе свет проходит через поляризотор, а затем поляризованный луч разделяется на два луча с помощью призмы Номарского, которые проходят через образец разными оптическими путями. Длина этих оптических путей различна. Впоследствии эти лучи соединяются во второй призме и в анализаторе при слиянии интерферируют. Это позволяет создать объемное рельефное изображение, соответствующее изменению оптической плотности образца, акцентируя линии и границы.
****************************************
Ниже я покажу примеры микроскопирования этими тремя методами (Bright field, Phase-contrast, DIC) двух разных объектов - пыльцу шиповника и эпителиальную клетку полости рта.
Пыльца шиповника
Куст как куст, шиповник как шиповник. Растет на газончике у работы. Производит тонну пыльцы.
Объектив 10х, увеличение в 100 раз.
Взяла лепесток с пыльцой и посмотрела под микроскопом. Зерна пыльцы непрозрачные и хорошо видны. Видно даже бороздку на каждом из них. Клетки лепестка тоже неплохо различимы. В каждой клетке проглядывается ядро.
Объектив 40х, увеличение в 400 раз.
Сфокусироваться очень сложно, потому что смотрю на неровную поверхность и без покровного стекла.
Объектив 40х, увеличение в 400 раз.
А теперь отдельное пыльцевое зерно посмотренное под микроскопом тремя выше описанными методами. Видно, что BF дает плоское изображение, Ph-C - светящиеся контуры на черном фоне, а DIC объемное 3D изображение и возможность рассмотреть неровности на поверзности пыльцы.
А теперь те же самые картинки из коллажа, только крупным планом.
Bright Field.
Phase-contrast.
DIC. Как на поверхность луны смотришь. =)
Объектив 100х, увеличение в 1000 раз.
Еще одно пыльцевое зерно, но увеличенное в 1000 раз. Зернышко чем-то напоминает кофейное!
Эпителиальная клетка слизистой рта
Переходим к следующему объекту - эпителиальной клетке слизистой рта. Соскоб слизистой полости рта - это один из самых популярных приемов, которые используются на микроскопных лабораторках в школе и универе. Настолько легко и доступно (и безумно скучно, когда 10 раз подряд), что даже серьезно готовиться не надо. Если есть хотя бы один рот, лабораторка состоится. =))
Строение эпительальной клетки рта очень простое. Она состоит из ядра, цитоплазмы (содержимое клетки) и плазматической мембраны, которая окружает клетку и создает форму.
Объектив 40х, увеличение в 400 раз.
Смотрим на клетки (моего, вестимо) рта тремя разными методами.
Bright field: клетки прозрачные и совсем не интересные.
Phase-contrast: проявляются новые ранее невидимые компоненты клетки - "зернистость".
DIC: объемное изображение поверхности в стиле "луны".
Объектив 100х, увеличение в 1000 раз.
Еще один пример эпителиальной клетки, но увеличение в 1000 раз.
Bright field.
Phase-contrast.
DIC.
Объснив на пальцах эти три метода мне будет проще рассказывать в следующих постах про то, что я уже намикроскопировала и собираюсь скоро показать. Надеюсь, получилось *оносительно* понятно.
*
В этот раз я хочу поговорить о нескольких методах световой микроскопии и на примерах показать их отличия. Простенько расскажу об устройстве светового микроскопа. Объясню три метода микроскопирования (Bright field, Phase-contrast, DIC) и покажу их различия на двух разных объектах - пыльце шиповника и эпителиальной клетке полости рта. Если не осилите теорию (я тоже не с первого раза врубилась, хаха), то можно просто забавные картинки посмотреть.
Базовое устройство светового микроскопа
Изучение препарата (образца) осуществляется в проходящем свете, источником которого может быть обычное освещение комнаты или специальные лампы. С помощью зеркала свет направляется в конденсор. Это короткофокусная линза или система линз, которая собирает и направляет лучи от источника света на образец увеличивая его освещенность. Далее свет проходит через сам препарат лежащий на предметном столике, затем проходит через объектив и поступает в окуляр, в который мы и рассматриваем полученное изображение.
Методы световой микроскопии (некоторые из них)
Существует множество методов световой микроскопии. То, что я описала выше, это самый простой случай - светопольная микроскопия или микроскопирование в светлом поле (по-английски bright field). Образец просто освещается рассеянным светом, а проходящий через него свет преломляется и формирмирует контрастное изображение. Но такой способ подходит не для всех образцов. Если они окрашены с помощью специальных красителей, то изображение четкое. А если нужно посмотреть под микроскопом прозрачные (например, клетки) и желательно живые объекты (например, бактерии или простейших), то информация от таких изображений стремится к нулю. Но если изменить параметры освещения или использовать особые фильтры, то препарат можно увидеть в другом ракурсе и детальнее открывая то, что раньше было скрыто.
Микроскоп Olympus BX53, которым я сейчас микроскопирую, позволяет использовать фазово-контрастный и интерференционный метод, о которых я расскажу подробнее.
Фазово-констрастная микроскопия (Phase-contrast) позволяет получить контрастное изображение прозрачных или бесцветных объектов, в частности живые неокрашенные препараты. Световая волна, проходящая через множество элементов препарата, претерпевает разные изменения по фазе (фазовый рельеф). Эти фазовые изменения глазу не видны, но с помощью специального оптического устройства (кольцевой диафрагмы в конденсоре и фазовой пластинки в объективе) преобразуются в изменения амплитуды световой волны, то есть изменение яркости, которые глазом уже видны. Получаемое таким образом изображение называется фазово-контрастным.
Интерференционная микроскопия (Differential interference contrast (DIC) microscopy). Ее еще называют интерференционно-контрастная микроскопия или микроскопия Номарского. В этом методе свет проходит через поляризотор, а затем поляризованный луч разделяется на два луча с помощью призмы Номарского, которые проходят через образец разными оптическими путями. Длина этих оптических путей различна. Впоследствии эти лучи соединяются во второй призме и в анализаторе при слиянии интерферируют. Это позволяет создать объемное рельефное изображение, соответствующее изменению оптической плотности образца, акцентируя линии и границы.
****************************************
Ниже я покажу примеры микроскопирования этими тремя методами (Bright field, Phase-contrast, DIC) двух разных объектов - пыльцу шиповника и эпителиальную клетку полости рта.
Пыльца шиповника
Куст как куст, шиповник как шиповник. Растет на газончике у работы. Производит тонну пыльцы.
Объектив 10х, увеличение в 100 раз.
Взяла лепесток с пыльцой и посмотрела под микроскопом. Зерна пыльцы непрозрачные и хорошо видны. Видно даже бороздку на каждом из них. Клетки лепестка тоже неплохо различимы. В каждой клетке проглядывается ядро.
Объектив 40х, увеличение в 400 раз.
Сфокусироваться очень сложно, потому что смотрю на неровную поверхность и без покровного стекла.
Объектив 40х, увеличение в 400 раз.
А теперь отдельное пыльцевое зерно посмотренное под микроскопом тремя выше описанными методами. Видно, что BF дает плоское изображение, Ph-C - светящиеся контуры на черном фоне, а DIC объемное 3D изображение и возможность рассмотреть неровности на поверзности пыльцы.
А теперь те же самые картинки из коллажа, только крупным планом.
Bright Field.
Phase-contrast.
DIC. Как на поверхность луны смотришь. =)
Объектив 100х, увеличение в 1000 раз.
Еще одно пыльцевое зерно, но увеличенное в 1000 раз. Зернышко чем-то напоминает кофейное!
Эпителиальная клетка слизистой рта
Переходим к следующему объекту - эпителиальной клетке слизистой рта. Соскоб слизистой полости рта - это один из самых популярных приемов, которые используются на микроскопных лабораторках в школе и универе. Настолько легко и доступно (и безумно скучно, когда 10 раз подряд), что даже серьезно готовиться не надо. Если есть хотя бы один рот, лабораторка состоится. =))
Строение эпительальной клетки рта очень простое. Она состоит из ядра, цитоплазмы (содержимое клетки) и плазматической мембраны, которая окружает клетку и создает форму.
Объектив 40х, увеличение в 400 раз.
Смотрим на клетки (моего, вестимо) рта тремя разными методами.
Bright field: клетки прозрачные и совсем не интересные.
Phase-contrast: проявляются новые ранее невидимые компоненты клетки - "зернистость".
DIC: объемное изображение поверхности в стиле "луны".
Объектив 100х, увеличение в 1000 раз.
Еще один пример эпителиальной клетки, но увеличение в 1000 раз.
Bright field.
Phase-contrast.
DIC.
Объснив на пальцах эти три метода мне будет проще рассказывать в следующих постах про то, что я уже намикроскопировала и собираюсь скоро показать. Надеюсь, получилось *оносительно* понятно.
*
