nervo4ka | Занимательная микроскопия: кишечник свиньи

*
Как вы провели свой ~~Мир. Труд. Май~~. первомай? Я неожиданно ударно: 12-ти часовым рабочим днем, 10 из которых микроскопировала поросячьи кишки. Хотя pig gut звучит менее тошнотно. ;))

Предыстория
Когда я только начала работать в микроскопном центре, одним из первых заданий, которое дала мне начальница, стало помочь ей обработать фотографии сделанные по какому-то коммерческому проекту. Тогда я не очень поняла, что это было, но и без каких-либо знаний смогла легко объединить группы разрозненных фотографий в полное изображение.

Пару месяцев назад к нам в лабу пришел парень с какой-то странной субстанцией и начал кромсать ее на куски. Оказалось, что это кишечник свиньи, который Дж. потом микроскопировала. Вонь стояла такая, что не продохнуть во всей лабе. Более того нужный микроскоп находится как раз рядом с моим офисом, и весь этот аромат прямым ходом летел ко мне. Я тогда дверь прикрыла и подумала: "Славатехоспади, что не мне нужно ЭТИМ заниматься". Как говорится, бойтесь своих мыслей.

Неделю назад Дж. переслала мне какое-то письмо со словами: "Помнишь, к нам парень с кишками приходил? Вот он опять придет, и нужно с ним закончить эксперимент, а я очень занята написанием годового отчета. Сделаешь?" Как говорится, почему бы и нет? Узнаю что-нибудь новенькое, вам расскажу. Вот и узнала.

Теория
Рассказываю со слов начальницы, как сама поняла, а остальное догуглила. Парень работает в компании, которая разрабатывает специальные красители для хромоэндоскопии. Это метод окрашивания тканей, дополняющий эндоскопические исследования c целью расширения возможности выявления минимальных дефектов слизистой оболочки, детализации протяженности, границ, структурных особенностей повреждений и их численности.

Красители бывают:
- Абсорбирующие (окрашивающие) - метод основан на абсорбции красителя эпителиальными клетками или проникновение красителя в некротические ткани.
- Реактивные - наносится на поверхность слизистой оболочки и вступает в реакцию с эпителиальными клетками или компонентами секрета.
- Контрастные - используют для наблюдения за гастроинтестинальной морфологией и неподвижными изменениями. Синий цвет особенно контрастируется с красной слизистой оболочкой и выдвигает на первый план топографию ткани.
- Средства для татуировки - используются для предоперационного татуажа опухоли или новообразований во время эндоскопии.

Как раз последнюю группу красителей компания разрабатывает, чтобы сделать его наиболее ярким, устойчивым и легко находимым во время хирургических и лапароскопических операций. Я так понимаю, что перед операцией проводят эндоскопию/колоноскопию, с помощью красителя отмечают участки для удаления, а затем в течение нескольких дней проводят операцию. Если отметки нет, то хирургу довольно сложно найти нужную область, особенно, если опухоль маленькая или плоская. А с помощью татуажа эта проблема упрощается во много раз, что позволяет не упустить проблемные, но незаметные места. Поэтому краситель должен быть достаточно ярким и устойчим, чтобы не раствориться до операции.

Эксперимент
В нашем случае сотрудник компании тестировал 4 варианта красителей и использовал для этого кишечник свиньи. Выглядело это весьма впечатляюще. Он потрошил кишки и нарезал их на небольшие кусочки, куда делал инъекцию тестируемого вещества. На фото в шприце. Вонища стояяяяяла... Как будто кого-то стошнило, а убрать забыли.

Парень нарезал, а я микроскопировала. Надо сказать, что до меня вонь почти не доходила. Парню было куда хуже, потому что он шинковал ЭТО 6 часов подряд, чтобы сделать 64 образца (4 красителя х 16 кусочков).

А у меня заняло 10 часов, чтобы все это закончить.

Для работы использовали Leica DM6B Widefield microscope c объективом 2.5х. Плюс функция tile scanning, которая позволяет выделить зону интереса и запустить ее последовательное автоматическое сканирование. Затем программа сама объединяет эти картинки в одну, а это экономит уйму времени. Один образец мог состоять из 100-300 фотографий. Руками сшивать убьешься.

Результат
Я снимала в черно-белом режиме, так как главный интерес - это оценить интенсивность окрашивания тканей. Финальный результат выглядит так. Один из 64. =)

А начальница два месяца назад делала снимки на другом микроскопе, точнее даже стереоскопе, в цветном режиме. Там снимков было всего 8-15 на образец, но их потом приходилось сшивать вручную. Ей досталось всего 16, и она под конец уже изнывала. Поэтому когда речь зашла о 64 образцах, то мы переключились на более современное и функциональное оборудование, которое позволит сэкономить силы и время на пост-обработку, хотя сам процесс съемки затянулся на 10 часов.

Вот такие фотографии получились у нее.

Самое смешное, для того, чтобы сделать подобные снимки, совершенно не нужен микроскоп. Можно взять хорошую камеру, настроить свет и нафигачить 64 снимка за пару часов. Ведь чип в камере что микроскопа, что фотоаппарата аналогичный. Но нет, надо пойти сложным и более дорогим путем, потому что это звучит солиднее и круче. Ну и нам тоже профит, потому что коммерческие организации вне сети универа идут по двойному тарифу. Для них это песчинка в океане денег, а для университетского центра - условная половина месячного бюджета. =))

*